科研笔记（二）｜如何做好NCI-H358的细胞培养与基因编辑

NCI-H358细胞系的基因修饰包括基因敲除、点突变、KI、过表达和干扰等，赛业生物通过优化NCI-H358的培养条件及单克隆制备条件，实现NCI-H358基因编辑单克隆交付，可显著提高实验的准确性和可靠性，为肿瘤免疫研究提供更坚实的基础。

基因敲除

基于Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统，赛业生物可提供NCI-H358的KO细胞定制服务，交付单克隆纯合子。我们使用优化的转染体系将RNP直接递送到细胞内，gRNA切割效率高达90%以上，相比于质粒和病毒等CRISPR/Cas介导的方法，切割效率提升明显，脱靶效率明显降低，能更精准地切割目标DNA序列。

点突变

基于Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统我们可提供精准、高效的NCI-H358定点突变和KI细胞定制服务。通过优化的α-donor体系将人源化的Cas蛋白、gRNA和donor三组分转染至目的细胞，产生高效同源重组，HDR高达49%，实现单克隆纯合子交付。

稳转株

赛业生物优化升级了转染载体系统，凭借多年细胞生物学经验，建立了一套成熟稳定的基因过表达实验体系，能提供NCI-H358稳定表达外源基因或RNA干扰元件的稳定Cell Pool或单克隆细胞株，可获得蛋白高表达10倍以上。

● 细胞转染前确保状态良好，细胞密度70%左右；

● 消化时尽量吹散成单个细胞；

● 极限稀释法制备单克隆，使用赛业定制条件培养基，并额外添加10%的血清，当观察到有克隆长出后补充新鲜培养基继续培养。